Isolatie van muizen embryonale Hemogenic endotheelcellen

De specificatie van hemogenic endotheelcellen van embryonale vasculaire endotheel optreedt tijdens korte ontwikkelingsperiodes in verschillende weefsels, en is nodig voor de totstandkoming van definitieve HSPC van de muizen extra embryonale dooierzak, placenta, navelstreng schepen en de embryonale aorta-gonaden-mesonephros ( AGM) regio. De voorbijgaande aard en de geringe omvang van deze cel bevolking maakt haar reproduceerbare isolatie voor een zorgvuldige kwantificering en experimentele toepassingen technisch moeilijk. We hebben een fluorescentie-geactiveerde celsortering (FACS) -gebaseerde protocol voor gelijktijdige isolatie van hemogenic endotheelcellen en HSPC tijdens hun hoogtepunt generatietijden in de dooierzak en AGM vastgesteld. We tonen methoden voor dissectie van de dooierzak en AGM weefsels van muizenembryo's, en we presenteren geoptimaliseerd weefsel spijsvertering en antilichaam vervoeging voorwaarden voor maximale overleving van de cel voorafgaand aan de identificatie en opzoeken via FACS. Vertegenwoordiger FACS analysis percelen zijn aangetoond dat de hemogenic endotheelcellen en HSPC fenotypes te identificeren en beschrijven een-methylcellulose gebaseerde test voor het evalueren van hun bloedvormende potentieel op een klonale niveau.