Bruk av Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) for å undersøke Effector Trans Effektivitet av

Coxiella burnetii, den utløsende agent for Q-feber er en intracellulær patogen som er avhengig av en type IV Dot / Icm Sekresjon System for å etablere en replicative nisje. En kohort av effektorer er translokaliseres gjennom dette systemet inn i vertscellen for å manipulere vertsprosesser, og tillate etablering av en unik lysosom-avledet vacuole for replikasjon. Metoden som presenteres her omfatter en kombinasjon av to godt etablerte teknikker: spesifikk genet Slå ved hjelp av siRNA og måling av effektoren translokasjon ved å bruke et FRET-basert substrat som er avhengig av β-laktamase-aktivitet. Bruk av disse to tilnærmingene, kan vi begynne å forstå hvilken rolle vertsfaktorer i bakterie sekresjon systemets funksjon og effektor trans. I denne studien undersøkte vi hvilken rolle Rab5A og Rab7A, både viktige regulatorer av endocytic menneskehandel veien. Vi viser at stanse ekspresjonen av enten protein resulterer i en reduksjon i effektor translocation effektivitet. Disse metodene kan enkelt endres til å undersøke andre intracellulære og ekstracellulære patogener som også utnytter sekresjon systemer. På denne måte kan et globalt bilde av vertsfaktorer som er involvert i bakteriell translokasjon effektor bli avslørt.