Observerer Mitotisk divisjon og Dynamics i en Live Sebrafisk Embryo

Mitose er avgjørende for organismevekst og differensiering. Prosessen er svært dynamisk og krever beordret hendelser for å oppnå riktig kromatin kondens, microtubule-kinetochore vedlegg, kromosom segregering, og cytokinese i en liten tidsramme. Feil i den delikate prosessen kan føre til sykdom hos mennesker, inkludert fødselsskader og kreft. Tradisjonelle tilnærminger som undersøker humane mitotisk sykdomstilstander er ofte avhengige av cellekultursystemer, som mangler den naturlige fysiologi og utviklings / vev-spesifikk sammenheng fordelaktig når man vil studere human sykdom. Denne protokollen overvinner mange hindringer ved å tilveiebringe en måte å visualisere, med høy oppløsning, kromosom dynamikk i et virveldyr system, sebrafisk. Denne protokollen vil detalj en tilnærming som kan brukes for å oppnå dynamiske bilder av dele celler, som inkluderer: in vitro transkripsjon, sebrafisk avl / oppsamling, embryo embedding, og time-lapse imaging. Optimalisering og modifications av denne protokollen er også utforsket. Bruke H2A.F / Z-EGFP (etiketter kromatin) og mCherry-CAAX (etiketter cellemembranen) mRNA-injiserte embryoer, mitose i AB villtype, auroraB ^hi1045, og esco2 ^hi2865 mutant sebrafisk er visualisert. Høy oppløsning levende avbildning i sebrafisk gjør det interessant å observere flere mitoser til statistisk tallfeste mitotiske feil og timing av mitotisk progresjon. I tillegg er observasjon av kvalitative aspekter som definerer feil mitotiske prosesser (dvs. congression defekter, missegregation av kromosomer, etc.) og utilbørlig kromosom utfall (dvs. Aneuploidy, polyploidi, mikrokjerner, etc.) observert. Denne analysen kan brukes til observasjon av vev differensiering / utvikling, og er mottagelig for anvendelse av mutant sebrafisk og farmakologiske midler. Visualisering av hvordan defekter i mitose føre til kreft og utviklingsforstyrrelser vil sterktøke forståelsen av patogenesen av sykdommen.