Interzelluläre Gap Junction-Kommunikation: Eine funktionelle Biomarker zur Beurteilung Unerwünschte Auswirkungen von Schadstoffen und Toxinen und gesundheitlichen Vorteile von Natural Products

Dieses Protokoll beschreibt ein Skalpell Laden-Fluoreszenzfarbstoffübertragung (SL-DT) Technik, die interzelluläre Kommunikation über Gap Junction Kanälen misst, das ein wichtiger interzellulären Prozess, durch den Gewebshomöostase gehalten wird. Unterbrechung der interzellulären Gap Junction - Kommunikation (GJIC) durch Noxen, Toxine, Drogen usw. zu zahlreichen negativen Auswirkungen auf die Gesundheit in Verbindung gebracht worden. Viele genetisch-bedingte Krankheiten wurden Mutationen in Gap Junction-Genen verbunden. Die SL-DT-Technik ist eine einfache Funktionstest für die simultane Beurteilung der GJIC in einer großen Population von Zellen. Der Assay beinhaltet Vorbelastung Zellen mit einem fluoreszierenden Farbstoff kurz mit einer Skalpellklinge durch eine Population von Zellen, die Zellmembran gestört. Der Fluoreszenzfarbstoff wird dann für eine bestimmte Zeit zu benachbarten Zellen zu durchqueren, durch gap junction Kanäle erlaubt. Der Assay wird dann durch Zugabe von Formalin zu den Zellen beendet. Die Ausbreitung der Fluorescent Farbstoff durch eine Population von Zellen mit einem Epifluoreszenz-Mikroskop beurteilt und die Bilder werden mit einer beliebigen Anzahl von morphologisch Softwarepakete analysiert, die verfügbar sind, einschließlich Pakete freie Software auf dem öffentlichen Bereich gefunden. Dieser Test wurde auch für in vivo - Studien unter Verwendung von Gewebeschnitten aus verschiedenen Organen von behandelten Tieren angepasst. Insgesamt kann der SL-DT - Test eine breite Palette von in - vitro - pharmakologischen und toxikologischen Bedürfnisse dienen, und kann möglicherweise für einen hohen Durchsatz Set-up - Systeme mit automatisierten Fluoreszenzmikroskopie Bildgebung und Analyse angepasst werden , um mehr Proben in kürzerer Zeit aufzuklären.