Visualisatie van HIV-1 Gag Binding aan Giant Unilamellaire bolletjes (GUV) Membranen

De structurele eiwitten van HIV-1, Pr55 ^Gag (of Gag), bindt aan het plasmamembraan van cellen tijdens de virus assemblageproces. Membraanbinding van Gag is een essentiële stap voor de vorming virusdeeltje, omdat een defect in Gag membraan binding resulteert in een ernstige vermindering van virale deeltjes productie. Mechanistisch data van Gag-lipide membraaninteracties krijgen, in vitro methoden op basis van NMR, eiwit voetafdruk, oppervlakte plasmon resonantie, liposoom flotatie centrifugatie of fluorescentie lipide bead binding tot dusver ontwikkeld. Echter, elk van deze in vitro werkwijzen zijn beperkingen. Sommige van deze beperkingen te overwinnen en zorgen als aanvulling op de eerder vastgestelde methoden, ontwikkelden we een in vitro assay waarbij interacties tussen HIV-1 Gag en lipidemembranen plaatsvinden in een "cel-achtige" omgeving. In deze test, Gag binding aan lipide membranen visueel geanalyseerd met YFP-Tagged Gag gesynthetiseerd in een tarwekiemen-gebaseerde in vitro translatie-systeem en GUVs voorbereid door een electroformation techniek. Hier beschrijven we de achtergrond en de protocollen gemyristoyleerde full-length Gag eiwitten en GUV membranen die nodig zijn voor de test te verkrijgen en om binding door microscopie detecteren Gag-GUV.