måle

Adenosin trifosfat-hydrolyserende enzymer, eller ATPaser, spille en avgjørende rolle i et mangfoldig utvalg av cellulære funksjoner. Disse dynamiske proteiner kan generere energi til mekanisk arbeid, slik som protein menneskehandel og degradering, oppløst stoff transport, og cellulære bevegelser. Protokollen er beskrevet her er en grunnleggende undersøkelse for å måle in vitro-aktiviteten av rensede ATPaser for funksjonell karakterisering. Proteiner hydrolyserer ATP i en reaksjon som fører til uorganisk fosfat frigjøring, og mengden av fosfat frigjort blir deretter kvantifisert ved hjelp av en kolorimetrisk analyse. Denne svært tilpasningsdyktig protokollen kan tilpasses for å måle ATPase-aktivitet i kinetiske eller endepunkt analyser. En representant protokollen er gitt her er basert på aktiviteten og krav EPSE, AAA + ATPase involvert i Type II Utskillelse i bakterien Vibrio cholerae. Mengden av renset protein som er nødvendig for å måle aktivitet, lengden av analysen og timingen og antallet sampling intervaller, buffer og salt sammensetning, temperatur, co-faktorer, sentralstimulerende midler (hvis noen), etc. kan variere fra det som er beskrevet her, og dermed noen optimalisering kan være nødvendig. Denne protokollen gir en grunnleggende rammeverk for å karakterisere ATPaser og kan utføres raskt og enkelt kan justeres etter behov.