調製及び器官胸腺スライス培養の応用

機能性、自己寛容T細胞レパートリーの生成をもたらすユニークかつ高度に組織化された胸腺微小環境における胸腺の選択に進む。T系譜コミットメントと開発を研究するためのin vitroモデルは、このプロセスに貴重な洞察を提供してきました。しかしながら、これらのシステムは、T細胞の発達に必要な完全な三次元胸腺環境を欠いており、従って、 インビボ胸腺選択の不完全な近似値です。モデル化T細胞の発達に関連した課題のいくつかは、完全にT細胞を開発する胸腺選択をサポートする完全な胸腺の微小環境を提供し、その場モデルで使用することによって克服することができます。胸腺スライス器官培養物は、 その場での技術に存在補完します。胸腺スライスは、胸腺皮質と髄質領域の整合性を維持し、定義された発生段階の、または内因性のT cのオーバーレイ胸腺細胞の発達を研究するためのプラットフォームを提供します成熟胸腺微小環境内ells。マウスあたり〜20のスライスを生成する能力を考えると、胸腺のスライスは、ハイスループット実験のための拡張性の面でユニークな利点を提示します。さらに、多様な遺伝的背景は異なる胸腺サブセットまたは他の細胞集団をオーバーレイする胸腺スライスと可能性を生成する際の相対的な容易さは、この方法の汎用性を高めます。ここでは、胸腺スライス、単離および胸腺細胞のオーバーレイ、およびフローサイトメトリー分析のために胸腺スライスの解離を調製するためのプロトコルを説明します。このシステムは、非従来型のT細胞の発達を研究するだけでなく、胸腺細胞の移行、胸腺間質細胞の相互作用、及び二光子顕微鏡で胸腺の選択に関連するTCRシグナルを可視化するために適合させることができます。