Transkriptions-Analyse von RNA Nascent FISH

Die Plazenta leitet sich von einer extraembryonalen Linie, die Trophektoderm. In der peri-Implantation murine Blastozysten, unterscheiden Wand Trophektoderm Zellen in primäre trophoblast Riesenzellen (TGCs), während die polare Trophektoderm der inneren Zellmasse liegt, später zu wuchern weiter in sekundäre TGCs unterscheiden. TGCs spielen eine Schlüsselrolle bei der Entwicklung der Plazenta und sind essentiell für eine erfolgreiche Schwangerschaft. Untersuchung der Transkriptionsregulation bestimmter Gene während nach der Implantation Entwicklung kann Einblicke in TGCs geben Entwicklung. Zellen des ectoplacental Kegels (EPC) von Embryonen bei 7-7,5 Tagen der Trächtigkeit (E7-7.5), von dem polaren Trophektoderm abgeleitet, differenzieren sich in Sekundär TGCs ^1. TGCs kann in situ auf Kryostatschnitten von Embryonen bei E7 untersucht werden , obwohl die Anzahl von TGCs in diesem Stadium sehr niedrig ist. Ein alternatives Mittel sekundären TGCs der Analyse ist kurzfristige Kulturen einzelner EPCs von E7 Embryo zu verwenden,s. Wir schlagen vor , eine Technik , die Transkriptionsstatus von Genen von Interesse in vivo sowohl und auf der Ebene einzelner Zellen in vitro zu untersuchen , unter Verwendung von Fluoreszenz in situ Hybridisierung (RNA FISH) im Entstehen begriffenen Transkripte zu visualisieren. Diese Technik liefert eine direkte Auslesung der Genexpression und erlaubt die Beurteilung der chromosomalen Status TGCs, die große endoreplicating Zellen sind. Tatsächlich ist ein wesentliches Merkmal der terminalen Differenzierung von TGCs, dass sie den Zellzyklus zu verlassen und durchlaufen mehrere Runden von endoreplication.This Ansatz kann angewendet werden, um Expression eines beliebigen Gens von Autosomen und / oder Geschlechtschromosomen exprimiert zu erkennen und wichtige Informationen in Entwicklungs liefern Mechanismen sowie Plazentakrankheiten.