の新生RNA FISHによる転写分析

胎盤は、1胚体外系統、栄養外胚葉に由来します。内部細胞塊を覆う極性栄養外胚葉が、後に二次TGCsに分化増殖し続けている間ペリ移植マウス胚盤胞では、壁画栄養外胚葉細胞は、初代​​栄養膜巨細胞（TGCs）に分化します。 TGCsは、胎盤の開発に重要な役割を果たし、妊娠の成功のために不可欠です。移植後の開発中に特定の遺伝子の転写調節の検討TGCs開発への洞察を与えることができます。極性栄養外胚葉由来妊娠（E7-7.5）の7-7.5日目の胚からの栄養膜円錐（EPC）の細胞は、二次TGCs ¹に分化します。 TGCsの数は、この段階では非常に低いがTGCsはE7で胚のクリオスタット切片上で、 その場で研究することができます。二次TGCsを分析する代替手段E7胚から個々のEPCの短期培養を使用することです秒。我々は、新生転写産物を可視化するために、in situハイブリダイゼーション（RNA FISH）、蛍光を使用して、単一細胞レベルでのインビボおよびインビトロの両方において目的の遺伝子の転写状態を調査する手法を提案します。この技術は、遺伝子発現の直接的な読み出しを提供し、大endoreplicating細胞ひとつは、TGCの染色体の状態の評価を可能にします。実際、TGCsの分化の重要な特徴は、それらが細胞周期を終了し、endoreplication.Thisアプローチの複数ラウンドを受けることである常染色体および/または性染色体から発現される任意の遺伝子の発現を検出するために適用することができ、発達に重要な情報を提供することができますメカニズムだけでなく、胎盤の疾患。