Transkriptions Analys av Nascent RNA FISH av

Moderkakan kommer från en extra embryonal härstamning, trophectoderm. I peri-implantation mus blastocyst, väggmålning trophectoderm celler differentierar till primär trofoblasten jätteceller (TGCs) medan den polära trophectoderm liggande inre cellmassan fortsätter att föröka sig senare differentiera till sekundära TGCs. TGCs spelar en viktig roll i utvecklingen av moderkakan och är avgörande för en lyckad graviditet. Undersökning av transkriptionell reglering av specifika gener under efter implantationen utveckling kan ge insikter TGCs utveckling. Celler av den ectoplacental konen (EPC) från embryon vid 7-7,5 dagars dräktighet (E7-7.5), som härrör från den polära trophectoderm, differentierar till sekundära TGCs ^1. TGCs kan studeras in situ på kryostatsnitt av embryon vid E7 även om antalet TGCs är mycket låg i detta skede. Ett alternativt sätt att analysera sekundär TGCs är att använda kortsiktiga kulturer av enskilda EPC från E7 embryos. Vi föreslår en teknik för att undersöka den transkriptionella statusen av gener av intresse både in vivo och in vitro vid encelliga nivå med hjälp av fluorescerande in situ-hybridisering (RNA FISH) för att visualisera begynnande transkript. Denna teknik ger en direkt avläsning av genuttryck och möjliggör bedömning av den kromosomala status TGCs, som är stora endoreplicating celler. I själva verket är en viktig del av terminal differentiering av TGCs att de lämnar cellcykeln och genomgå flera omgångar av endoreplication.This tillvägagångssätt kan tillämpas för att detektera uttryck av varje gen uttrycks från autosomer och / eller könskromosomer och kan ge viktig information i utvecklings mekanismer samt moderkakan sjukdomar.