Implementazione di un sistema di infezione permeabile membrana Insert-based per studiare gli effetti di secrete batteriche tossine su cellule ospiti

Molti batteri patogeni secernono tossine potenti per aiutare nella distruzione del tessuto ospite, ad avviare modifiche alla segnaletica nelle cellule ospiti o di manipolare le risposte del sistema immunitario nel corso di infezione. Anche se i metodi sono stati sviluppati per purificare con successo e produrre molti di questi importanti fattori di virulenza, ci sono ancora molte tossine batteriche cui struttura unica o estesa modificazioni post-traslazionali le rendono difficili da purificare e studiare in sistemi in vitro. Inoltre, anche quando la tossina pura può essere ottenuto, ci sono molte sfide associate con studiare gli effetti specifici di una tossina in condizioni fisiologiche importanti. La maggior parte dei modelli di colture cellulari in vitro volti a valutare gli effetti delle tossine batteriche secrete sulle cellule ospiti coinvolgere incubando cellule ospiti con una dose di una volta di tossina. Tali metodi poco approssimano quello cellule ospiti in realtà esperienza durante un'infezione, in cui la tossina viene continuamente prodotto dacellule batteriche e lasciato accumulare gradualmente durante il corso dell'infezione. Questo protocollo descrive la progettazione di un sistema di infezione batterica basato inserto membrana permeabile per studiare gli effetti di Streptolisina S, un potente tossina prodotta da streptococco di gruppo A, su cheratinociti epiteliali umane. Questo sistema imita più da vicino l'ambiente fisiologico naturale durante un'infezione rispetto ai metodi in cui la tossina pura o supernatanti batteriche sono applicati direttamente alle cellule ospiti. È importante sottolineare che questo metodo elimina anche la polarizzazione di risposte dell'ospite che sono dovuti al contatto diretto tra i batteri e le cellule ospiti. Questo sistema è stato utilizzato per valutare efficacemente gli effetti di Streptolisina S (SLS) sull'integrità ospitante membrana, vitalità cellulare, e le risposte di segnalazione cellulare. Questa tecnica può essere facilmente applicata allo studio di altri fattori di virulenza secreti su una varietà di tipi di cellule di mammifero ospitante per studiare il ruolo specifico di un fattore batterica secreto durante il corso di infezione.