Utvikling av en spytt antistoff Multiplex Immunoassay å måle menneskelig eksponering for miljø patogener

Etiologi og konsekvensene av menneskelig eksponering for miljø patogener er av stor bekymring over hele verden, og dermed vil evnen til å vurdere eksponering og infeksjoner ved bruk av kostnadseffektive, high-throughput tilnærminger være uunnværlig. Dette manuskriptet beskriver utvikling og analyse av en kule-baserte multipleks immunoassay stand til å måle nærværet av antistoffer i humant spytt til flere patogener samtidig. Spytt er spesielt attraktivt i denne anvendelse fordi den er ikke-invasiv, billigere og enklere å samle enn serum. Antigener fra miljøet patogener ble koblet til karboksylerte mikrosfærer (perler) og brukes til å måle antistoffer i meget små volumer av human spyttprøver ved hjelp av en vulst basert, løsning-fase-analysen. Perler ble kombinert med antigener fra Campylobacter jejuni, Helicobacter pylori, Toxoplasma gondii, noroviruses (G I.1 og G II.4) og hepatitt A virus. For å sikre at antigenene var tilstrekkelig koblet tilkulene, kobling ble bekreftet ved bruk av artsspesifikke, animalske primære fangst-antistoffer, etterfulgt av inkubasjon med biotinylerte anti-arter sekundære deteksjon-antistoffer og streptavidin-R-fykoerytrin reporter (SAPE). Som en kontroll for å måle ikke-spesifikk binding, ble en perle sett behandlet identisk med de andre, bortsett fra at det ikke ble koblet til en hvilken som helst antigen. De antigen-koblet og kontroll perler ble deretter inkubert med fremadrettet oppsamlede humane spyttprøver, målt på en høy gjennomstrømning analysator basert på prinsippene om flowcytometri, og nærværet av antistoffer mot hvert antigen ble målt i Median fluorescensintensitet enheter (MFI) . Denne multiplex immunoassay har en rekke fordeler, blant annet mer data med mindre prøven; reduserte kostnader og arbeid; og evne til å tilpasse analysen til mange mål av interesse. Resultater indikerer at spytt multipleks immunoassay kan være i stand til å identifisere tidligere eksponeringer og infeksjoner, som kan være especially nyttig i overvåking studier som involverer store befolkningsgrupper.