Abstract
Immunology and Infection
本文从小型全血样本中的白细胞快速,标准化富集的协议描述。这个过程是基于红细胞的低渗裂解和可以应用到人类的样本以及非人类来源的血液。的约50至100微升小初始样品体积使得这种方法适用于反复采血从小型实验室动物。此外,白细胞富集分钟之内,并与有关化学品和仪器仪表材料低的努力所取得,使得这种方法适用于多个实验室环境。
白细胞的标准化纯化是用高选择性染色法来评价血红素过氧化物酶的卤化过氧化物酶,髓过氧化物酶(MPO)和嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO), 即,次氯酸和次溴酸(次氯酸和次溴酸)的形成相结合。虽然MPO是NEUT强烈表达rophils,在人血液中,以及在单核细胞中最丰富的免疫细胞类型,相关的酶的EPO是专门在嗜酸性粒细胞中表达。这些酶的卤化活性是通过使用几乎HOCl-和次溴酸特异性染料氨基苯基荧光素(APF)和主过氧化物过氧化衬底氢处理。在随后的流式细胞分析所有过氧化物酶阳性细胞(嗜中性粒细胞,单核细胞,嗜酸性粒细胞)的区分和它们的卤化过氧化物酶的活性可以被量化。因为APF染色可以与细胞表面标记物的应用相结合,这个协议可以扩展到专门处理白细胞亚级分。该方法适用于同时检测在人类和啮齿动物白细胞次氯酸和次溴酸的生产。
鉴于这些酶产品在慢性炎症性疾病的广泛和多样讨论免疫的作用,这个协议可能有助于更好地理解免疫白细胞衍生的血红素的过氧化物酶的相关性。
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