迅速なワンステップ酵素合成とトレハロース類似体のすべての水精製

化学的に修飾されたトレハロースのバージョン、またはトレハロース類似体は、他の分野の中で、生物学、バイオテクノロジー、および製薬科学の用途を有します。例えば、検出可能なタグを有するトレハロースアナログは結核菌を検出するために使用されており、結核診断用造影剤としての用途を有することができます。トレハロースの加水分解的に安定したバージョンはまた、ノンカロリー甘味料およびbioprotective剤としての使用のためのそれらの潜在的に追求されています。様々なアプリケーションのための化合物のこのクラスの魅力にもかかわらず、彼らの可能性は、それらの製造のための強固なルートがないために満たされていないままです。ここでは、化学合成に関連する問題を回避トレハロース類似体の迅速かつ効率的な一段階の生体触媒合成のための詳細なプロトコルを報告します。 サーモテナックスから耐熱性トレハロースシンターゼ（TRET）酵素を利用することにより、トレハロースアナログはgeneratすることができグルコース類似体および15から60分で（定量的変換まで）高い収率でウリジン二リン酸グルコースから一工程で編。スピン透析とイオン交換で構成されて簡単かつ迅速な非クロマトグラフィー精製プロトコルは、わずか45として分で水溶液中の濃度が既知の多くのトレハロースの類似体を提供することができます。未反応のグルコース類似体が残る場合には、トレハロースアナログ生成物のクロマトグラフィー精製を行うことができます。全体的に、この方法は効率的で、非化学者にアクセス可能であるトレハロース類似体の迅速合成および精製のための「グリーン」生体触媒のプラットフォームを提供します。この方法の適用を例示するために、我々は、合成、すべての水精製、および1時間未満とマイコバクテリアの有効蛍光検出を取ったそのすべてがマイコバクテリアのトレハロースベースのクリック化学プローブの投与のためのプロトコルについて説明します。今後は、OTHの中で、ということを想定しますERアプリケーションは、このプロトコルは、結核の診断のためのトレハロースベースのプローブの迅速な合成に適用することができます。例えば、短寿命放射性核種修飾トレハロースアナログ（ 例えば ^、18 F修飾トレハロース）は、陽電子放出断層撮影、コンピュータ断層撮影法（PET-CT）などの高度な臨床イメージング様式を使用することができます。