عزل البروتينات الدهنية عالية الكثافة لغير الترميز الصغيرة RNA الكمي

تنوع الرنا غير الترميز صغيرة (الحمض الريبي النووي الذواب) توسعا سريعا ودورهم في العمليات البيولوجية، بما في ذلك تنظيم الجينات، آخذة في الظهور. الأمر المثير للاهتمام، وجدت sRNAs أيضا خارج الخلايا وتكون موجودة في جميع السوائل البيولوجية ثابت. على هذا النحو، تمثل sRNAs خارج الخلية فئة جديدة من المؤشرات الحيوية المرض ويشارك على الأرجح في الخلايا مما يشير الى وشبكات الاتصالات بين الخلايا. لتقييم قدراتهم والمؤشرات الحيوية، sRNAs يمكن قياسها كميا في البلازما والبول، وغيرها من السوائل. مع ذلك، إلى فهم كامل للتأثير sRNAs خارج الخلية كإشارات الغدد الصماء، فمن المهم تحديد ناقلات التي تنقل وتحميهم في السوائل البيولوجية (على سبيل المثال، البلازما)، والتي تساهم الخلايا والأنسجة لحمامات الحمض الريبي النووي الذواب خارج الخلية، والخلايا والأنسجة قادرة قبول واستخدام خارج الخلية الحمض الريبي النووي الذواب. ولتحقيق هذه الأهداف، فمن الأهمية بمكان لعزل السكان نقية للغاية من الناقلات خارج الخليةلالتنميط الحمض الريبي النووي الذواب وتقدير. لقد أثبتنا سابقا أن البروتينات الدهنية، وخاصة البروتينات الدهنية عالية الكثافة (HDL)، والنقل الرنا الميكروية وظيفية (ميرنا) بين الخلايا وHDL-miRNAs تتغير بشكل ملحوظ في المرض. هنا، ونحن بالتفصيل بروتوكول جديد أن تستخدم جنبا إلى جنب HDL العزلة مع تنبيذ فائق الكثافة التدرج (DGUC) وسريع البروتين السائل اللوني (FPLC) للحصول على HDL نقية للغاية لتحديد ملامح المصب وتقدير من جميع sRNAs، بما في ذلك miRNAs، وذلك باستخدام كلا عالية التسلسل -throughput والنهج PCR في الوقت الحقيقي. وهذا البروتوكول أن يكون مصدرا قيما للتحقيق في sRNAs على HDL.