Un alto rendimiento, multiplexado y dirigida proteómico CSF ​​ensayo para cuantificar neurodegenerativas Biomarcadores y apolipoproteína E isoformas Estado

Muchas enfermedades neurodegenerativas todavía se carece de tratamientos eficaces. biomarcadores fiables para la identificación y clasificación de estas enfermedades serán importantes en el desarrollo de futuras terapias novedosas. A menudo, los posibles nuevos biomarcadores no llegan a la clínica debido a las limitaciones en su desarrollo y altos costos. Sin embargo, la proteómica dirigidos utilizando monitorización de reacción múltiple Liquid Chromatography-tandem / espectrometría de masas (MRM LC-MS / MS), usando específicamente espectrómetros de masas de triple cuadrupolo, es un método que se puede utilizar para evaluar rápidamente y validar biomarcadores para la traducción clínica en los laboratorios de diagnóstico . Tradicionalmente, esta plataforma se ha utilizado ampliamente para la medición de pequeñas moléculas en laboratorios clínicos, pero es el potencial para analizar las proteínas, que hace que sea una alternativa atractiva para ELISA (Enzyme-Linked ImmunosorEnsayo de doblado) a base de métodos. Se describe aquí cómo proteómica dirigida se puede utilizar para medir marcadores multiplexados de demencia, incluyendo la detección y cuantificación de lo conocido factor de riesgo apolipoproteína E isoforma 4 (ApoE4).

Con el fin de hacer que el ensayo adecuado para la traducción, que está diseñado para ser rápida, simple, altamente específico y rentable. Para lograr esto, cada paso en el desarrollo del ensayo debe ser optimizado para las proteínas individuales y tejidos que se analizan. Este método describe un flujo de trabajo típico que incluye varios consejos y trucos para el desarrollo de una proteómica dirigida MRM LC-MS / MS para la traducción .

El desarrollo del método se optimiza el uso de versiones sintetizadas de encargo de péptidos trípticos quantotypic, que calibran la MS para la detección y luego se disparó en el LCR para determinar la correcta identificación del péptido endógeno en la separación cromatográfica previa al análisis en la MS. Para lograr absoluTe cuantificación, marcadas por isótopos estables versiones estándar interno de los péptidos con aminoácidos corta etiquetas de secuencias de ácido y que contiene un sitio de escisión de tripsina, están incluidos en el ensayo.