Analysere Synaptic Modulation av

Nervesystemet har bemerkelsesverdig evne til å tilpasse seg og reagere på ulike stimuli. Dette nevrale justeringen er i stor grad oppnådd gjennom plastisitet på den synaptiske nivå. Den aktive sone (A) er den region på den presynaptiske membranen som medierer nevrotransmitter-frigjøring, og er sammensatt av en tett samling av stillas proteiner. AZS av bananflue (Drosophila) fotoreseptorer gjennomgå molekylær ombygging etter langvarig eksponering for naturlig lys fra omgivelsene. Således kan nivået av neuronal aktivitet kan flytte den molekylære sammensetning av AZ og bidra til regulering av den funksjonelle utgang.

Starter fra lyseksponering oppsett forberedelse til immunhistokjemi, denne protokollen detaljer hvordan å kvantifisere antallet, den romlige fordelingen, og delokalisering nivået av synaptiske molekyler ved AZS i Drosophila fotoreseptorer. Ved hjelp av bildeanalyse software, klynger av GFP-smeltet AZ komponent Bruchpilot ble identifisert for hver R8 fotoreseptoren (R8) axon terminalen. Oppdages Bruchpilot flekker ble automatisk tildelt individuelle R8 aksoner. For å beregne fordelingen av sted frekvens langs aksonet, gjennomførte vi en tilpasset programvare plugin. Hver axon start-punktet og sluttpunktet er manuelt definert og posisjonen for hver Bruchpilot flekk ble projisert på forbindelseslinjen mellom start- og sluttpunktet. I tillegg til antall Bruchpilot klynger, vi også kvantifisert delokalisering nivået Bruchpilot-GFP innenfor klynger. Disse målingene gjenspeiler i detalj romlig løst synaptiske dynamikk i en enkelt nervecelle under ulike miljøforhold på stimuli.