Abstract
Biochemistry
Biopanning bacteriana exibir bibliotecas é uma técnica comprovada para descoberta de reagente de afinidade de peptídeo para reconhecimento de alvos bióticos e abióticos. Reagentes de afinidade de peptídeo podem ser usados para aplicações semelhantes a anticorpos, incluindo detecção e terapêutica, mas são mais robustos e capazes de executar em ambientes mais extremos. Enriquecimento específico dos agentes de captura do peptide para um alvo da proteína de interesse é realçado usando métodos de triagem semi-automático que melhoram a vinculação e lavagem as etapas e, portanto, diminuem a ocorrência de falsos positivos aglomerantes. Um método de classificação semi-automático é descrito neste documento para uso com uma comercial automatizada magnético-ativado célula classificação dispositivo com um display bacteriano irrestrito classificação biblioteca expressando 15-mer aleatória de peptídeos. Com pequenas modificações, estes métodos são extensíveis a outros dispositivos, outras bibliotecas de classificação e outros organismos automatizados. Um objetivo principal deste trabalho é fornecer uma metodologia abrangente e expor o processo de pensamento aplicado na análise e minimizando a piscina resultante dos candidatos. Estas técnicas incluem análise de vinculação na célula usando fluorescência-ativado da pilha (FACS), de classificação para avaliar a afinidade e especificidade durante classificando e comparando os candidatos individuais, e a análise de peptídeo sequências para identificar tendências e sequências de consenso para compreender e melhorar potencialmente a afinidade de e especificidade para o alvo de interesse.
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