رقاقة المستندة إلى خلية ثقافة ثلاثي الأبعاد في المفاعلات الصغيرة Perfused

Summary

تصف لنا منبرا يعتمد على الشرائح الالكترونية لزراعة ثلاثية الأبعاد من الخلايا في الدقيقة المفاعلات الحيوية. يمكن للمرء منزل رقاقة تصل إلى 10 ميو. الخلايا التي يمكن زراعتها في ظل ظروف محددة بدقة فيما يتعلق بتدفق السائل والأكسجين الخ التوتر في العقيمة ، حلقة الدوران مغلقة.

Abstract

قمنا بتطوير ثقافة الخلية يعتمد على الشرائح الالكترونية لنظام زراعة ثلاثية الأبعاد من الخلايا. عادة ما يتم تصنيعها من شرائح غير القابلة للتحلل البوليمرات ، على سبيل المثال ، أو البولي ميتاكريلات بواسطة حقن الصغرى ، والنقش الساخنة الصغرى أو الصغيرة بالحرارة. ولكن ، يمكن أيضا أن تكون مصنوعة من البوليمرات الحيوية القابلة للتحلل. أبعادها الشاملة هي 0.7 1 × 20 × 20 × 0.7 ملم 1 (hxwxl). الميزات الرئيسية للرقائق المستخدمة هي إما الشبكة تصل إلى 1156 مكعب الحاويات الصغيرة (CF - رقاقة) كل منها في حجم 120-300 × 300 × 300 μ (hxwxl) أو تجاويف مستديرة بأقطار من 300 μ وبعمق 300 μ (ص رقاقة). يمكن للسقالة 10 منزل ميو. خلايا في تكوين ثلاثي الأبعاد. للحصول على المواد الغذائية الأمثل والغاز ، ويتم إدراج الشريحة في السكن مفاعل حيوي. في مفاعل حيوي هو جزء من حلقة مغلقة steril تداول أنه في أبسط التكوين ، وتتألف من additionaly مضخة وخزان أسطواني مع المتوسط ​​لتوريد الغاز. يمكن تشغيل مفاعل حيوي في التروية ، superfusion ، أو حتى وضع عملية مختلطة. لقد نجحنا في زراعة خطوط الخليوي ، وكذلك الخلايا الأولية لفترات تتراوح من عدة أسابيع. لخلايا الكبد الأولية الفئران يمكن أن تظهر لنا الحفاظ على وظائف عضوي النمط لأكثر من 2 اسابيع. لخطوط سرطان الخلايا الكبدية يمكننا إظهار تحريض جينات معينة لا الكبد أو قليلا عنها في الثقافة المونولاير القياسية. قد يكون النظام المفيد أيضا زراعة الخلايا الجذعية النظام منذ التجارب الأولى مع تمايز الخلايا الجذعية واعدة.

Protocol

توضح هذه الورقة استخدام منصة يعتمد على الشرائح الالكترونية (الشكل 1) لزراعة ثلاثي الأبعاد من خطوط الخلايا وكذلك الخلايا الأولية. منذ قيام العديد من الخلايا وظائف عضوي النمط التعبير فقط في بيئة 3D ، قمنا بتطوير شرائح البوليمر الذي يوفر السقالة التي يمكن أن تلتزم الخلاي.......

Discussion

وقد وضعنا برنامجا يعتمد على الشرائح الالكترونية لزراعة ثلاثية الأبعاد من الخلايا في المفاعلات الصغيرة perfused بنشاط. ويمكن تصنيع رقائق من غير القابلة للتحلل ، وكذلك البوليمرات القابلة للتحلل بواسطة حقن الصغرى ، والنقش الساخنة وكذلك التقنيات الدقيقة بالحرارة ^3. اعتمادا على .......

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Name	Company	Catalog Number	Comments
Cells	Other	ATCC	HB-8065
Collagen I from rat tail	Reagent	Roche Diagnostics	11 179 179 001
PARIS kit	Reagent	Ambion Inc.	AM1921
Syto16	Reagent	Invitrogen	S7578
anti cytokeratin 18	Antibody	Abcam plc	ab668	Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS
Anti E-cadherin	Antibody	Abcam plc	ab1416	Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS.
Goat anti-albumin	Reagent	Bethyl Laboratories	E80-129	Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS
Rabbit anti-mouse IgG1	Antibody	Invitrogen	A11059	Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA
Cy3 anti-goat IgG	Reagent	Jackson ImmunoResearch Lab	705-165-003	Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA