Чип основе трехмерной клеточной культуре в перфузии Микро-биореакторы

Summary

Мы описываем чип-платформы для трехмерного культивирования клеток в микро-биореакторов. Один чип может вмещать до 10 мил. клеток, которые можно выращивать в точно определенных условиях в связи с потоком жидкости и т.д. напряжения кислорода в стерильной, замкнутый контур циркуляции.

Abstract

Мы разработали чип основе клеточной культуры система трехмерного выращивания клеток. Чип, как правило, изготовлены из не-биоразлагаемых полимеров, например, поликарбоната или полиметилметакрилата микро литья под давлением, микро горячего тиснения или микро горячего формования. Но, он также может быть изготовлен из биоразлагаемых полимеров. Его габаритные размеры составляют 0,7 1 х 20 х 20 х 0,7 1 мм (ВxШxД). Основные особенности чипы, используемые либо сетки до 1156 кубических микро-контейнеры (CF-чип), каждая размером 120-300 х 300 х 300 μ (ВxШxД) или круглые углубления диаметром 300 μ и глубины в 300 μ (г-чип). Эшафот можно разместить 10 млн.. клеток в трехмерной конфигурации. Для оптимального питательного и газоснабжения, чип вставляется в биореакторе жилья. Биореактор является частью замкнутого контура циркуляции стерильные, что в простейшей конфигурации, дополнительно состоит из насоса ролика и средний резервуар с газом. Биореактор может быть запущен в перфузии, superfusion, или даже в смешанном режиме эксплуатации. Мы успешно культивируемых клеточных линий, а также первичные ячейки над периодами в несколько недель. Для крыс первичных клеток печени, мы могли бы показать сохранение органотипической функции в течение более 2 недель. Для линий гепатоцеллюлярной карциномы ячейки мы могли бы показать индукцию печени специфических генов нет или незначительно выраженных в стандартной культуры монослоя. Система также может быть полезна как выращивание стволовых клеток системе, так как первые опыты дифференцирование стволовых клеток были многообещающими.

Protocol

Эта статья описывает использование чип-платформы (рис. 1) для трехмерного выращивания клеточных линий, а также первичные ячейки. Так как многие клетки выразить органотипической функции только в 3D-среде, мы разработали чип полимера, который обеспечивает эшафот которой клетки могут прид?.......

Discussion

Мы разработали чип-платформы для трехмерного выращивания клеток в активное перфузии микро биореакторов. Чипы могут быть изготовлены из не поддающихся биохимическому разложению, а также биоразлагаемых полимеров методом микро литья под давлением, горячее тиснение, а также микро термоформования ?.......

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Name	Company	Catalog Number	Comments
Cells	Other	ATCC	HB-8065
Collagen I from rat tail	Reagent	Roche Diagnostics	11 179 179 001
PARIS kit	Reagent	Ambion Inc.	AM1921
Syto16	Reagent	Invitrogen	S7578
anti cytokeratin 18	Antibody	Abcam plc	ab668	Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS
Anti E-cadherin	Antibody	Abcam plc	ab1416	Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS.
Goat anti-albumin	Reagent	Bethyl Laboratories	E80-129	Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS
Rabbit anti-mouse IgG1	Antibody	Invitrogen	A11059	Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA
Cy3 anti-goat IgG	Reagent	Jackson ImmunoResearch Lab	705-165-003	Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA