Abstract
Chemistry
Lignin er en af de mest udbredte Biopolymerer på planeten og en større komponent af lignocellulose biomasse. Denne phenol polymer spiller en afgørende strukturel og beskyttende rolle i udvikling og liv i højere planter. Selv om de indviklede mekanismer regulere lignification processer i vivo kraftigt påvirker den industrielle revalorisering af mange plante-afledte produkter, har det videnskabelige samfund stadig en lang vej at gå for at dechifrere dem. I en enkel tre-trins arbejdsproces giver dobbelt mærkning protokollen præsenteres heri bioimaging undersøgelser af aktivt lignifying zoner af plantevæv. Det første trin består i den metaboliske indarbejdelse af to uafhængige kemiske reportere, surrogater af de to oprindelige monolignols, der giver anledning til lignin H - og G-enheder. Efter iblandingen i voksende lignin polymerer, er hver reporter derefter specielt mærket med sin egen fluorescerende sonde via en sekventiel kombination af bioorthogonal SPAAC/CuAAC Klik reaktioner. Kombineret med lignin autofluorescence, denne metode fører til, at generation af trefarvet lokalisering kort over lignin inden for plante cellevægge Konfokal Fluorescens mikroskopi og giver præcis geografisk information om tilstedeværelsen eller fraværet af aktive lignification maskiner på omfanget af plantevæv, celler og forskellige cellevæg lag.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved