Visualización dinámica de lignificación en plantas con la química Click: doble etiquetado es felicidad!

La lignina es uno de los biopolímeros más prevalentes en el planeta y un componente importante de la biomasa lignocelulósica. Este polímero fenólico desempeña un papel estructural y protección vital en el desarrollo y vida de las plantas superiores. Aunque los intrincados mecanismos de regulación procesos de lignificación en vivo fuertemente impactan la valorización industrial de muchos productos de origen vegetal, la comunidad científica todavía tiene un largo camino por recorrer para descifrarlos. En un flujo de trabajo de tres pasos simple, el protocolo de etiquetado doble aquí presentado permite estudios de Bioimagen de activamente lignifying zonas de tejidos de la planta. El primer paso consiste en la incorporación metabólica de dos reporteros químicas independientes, sustitutos de los dos monolignols nativas que dan lugar a lignina unidades H y G. Después de la incorporación al cultivo de polímeros de lignina, cada reportero entonces se etiqueta específicamente con su propia sonda fluorescente mediante una combinación secuencial de bioorthogonal SPAAC/CuAAC clic reacciones. Combinado con autofluorescencia de lignina, este enfoque conduce a la generación de mapas de localización tricolor de lignina en las paredes celulares por microscopía de fluorescencia confocal y proporciona información espacial precisa de la presencia o ausencia de activo maquinaria de lignificación en la escala de los tejidos vegetales, células y capas de la pared celular diferente.