5-Bromouridine ्र और Immunoprecipitation का उपयोग कर आरएनए संश्लेषण की जांच

जब स्थिर राज्य आरएनए स्तर दो शर्तों के बीच तुलना कर रहे हैं, यह अंतर है कि परिवर्तन उत्पादन या आरएनए के क्षरण में बदलाव के कारण होते हैं कि भेद करने के लिए संभव नहीं है. यह प्रोटोकॉल आरएनए उत्पादन की माप के लिए एक विधि का वर्णन करता है, immunoprecipitation द्वारा पीछा आरएनए के 5-Bromouridine लेबलिंग का उपयोग कर, जो एक छोटी समय सीमा के भीतर संश्लेषित आरएनए की जांच में सक्षम बनाता है (उदा., 1 ज) । α-amanitin और actinomycin डी जैसे विषैले transcriptional अवरोधकों के उपयोग पर 5-Bromouridine-लेबलिंग और immunoprecipitation का लाभ यह है कि अल्प अवधि के उपयोग के दौरान कोशिका व्यवहार्यता पर कोई या बहुत कम प्रभाव नहीं होते हैं । हालांकि, क्योंकि 5-Bromouridine-immunoprecipitation केवल लघु लेबलिंग समय के भीतर उत्पादित आरएनए कब्जा, धीरे के रूप में अच्छी तरह से उत्पादित के रूप में तेजी से नीचा आरएनए इस विधि द्वारा मापने के लिए मुश्किल हो सकता है. 5-Bromouridine-बला आरएनए 5 द्वारा कब्जा-Bromouridine-immunoprecipitation रिवर्स प्रतिलेखन, मात्रात्मक पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया, और अगली पीढ़ी अनुक्रमण द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है । आरएनए के सभी प्रकार की जांच की जा सकती है, और विधि इस उदाहरण में प्रस्तुत किया जाता है के रूप में mRNA को मापने के लिए सीमित नहीं है ।