Murine 골 수 유래 수지상 세포와 대 식 세포에 형광 성 융해 단백질의 표정

수지상 세포와 대 식 세포는 병원 체에 대 한 방어의 첫 번째 라인을 형성 하는 중요 한 세포 이다. 그들은 또한 적합 한 면역 반응의 개시에 중요 한 역할을 재생합니다. 이러한 세포와 실험 작업은 오히려 도전적 이다. 그들의 풍부한 장기와 조직에 상대적으로 낮습니다. 결과적으로, 그들은 큰 숫자에서 고립 될 수 없습니다. 그들은 또한 transfect cDNA 구문으로 어렵다입니다. Murine 모델에서 이러한 문제는 골 수 세포에 대 한 M-CSF 또는 수지상 세포에 대 한 GM-CSF의 창시자에서 생체 외에서 분화에 의해 부분적으로 극복할 수 있습니다. 이 방법에서는, 아주 몇몇 동물에서 이러한 셀의 대용량을 얻을 수입니다. 또한, 골 창시자 retroviral 벡터 들고 이전에 파생 하는 골 수 수지상 세포와 대 식 세포로의 분화 재배의 초기 단계 동안에 cDNA 구문으로 불리고 있습니다. 따라서, 이러한 셀에 다양 한 cDNA 구문 표현 하 retroviral 변환 뒤에 체 외에서 분화를 사용할 수 있습니다. 라이브 셀 이미징 형광 단백질, 탠덤 담긴 위하여 분석, 구조-기능 분석, 대 한의 포함 하 여 이러한 셀에 수행할 수 있는 실험의 범위를 확장 하는 실질적으로 소성 단백질을 표현 하는 능력 모니터링 바이오 센서와 다른 많은 세포질 기능. 이 문서에서는, 우리 붙일 태그가 단백질 코딩 벡터와 retroviral 변환 파생 murine 골 수 수지상 세포와 대 식 세포에 대 한 상세한 프로토콜을 설명 합니다. 두 어댑터 단백질, OPAL1 및 PSTPIP2, 예를에 우리 cytometry에 현미경의 실용적인 응용 프로그램을 보여 줍니다. 우리는 또한 장점 및이 방법의 한계를 설명.