Uttrykk for fluorescerende Fusion proteiner i Murine Ben margtransplantasjon-avledet dendrittiske celler og makrofager

Dendrittiske celler og makrofager er avgjørende celler som danner den første linjen i forsvaret mot patogener. De kan også spille viktige roller i initiering av en adaptiv immunrespons. Eksperimentelt arbeid med disse cellene er ganske utfordrende. Sin overflod i organer og vev er relativt lav. Som et resultat kan ikke de bli isolert i stort antall. De er også vanskelig å transfect med cDNA konstruksjoner. I murine modellen, kan disse problemene være delvis overvunnet av i vitro differensiering fra benmargen progenitors i nærvær av M-CSF for makrofager eller GM-CSF for dendrittiske celler. På denne måten er det mulig å få store mengder av disse cellene fra svært få dyr. Videre kan benmarg progenitors være transduced med retroviral vektorer bærer cDNA konstruksjoner i tidlige stadier av dyrking før deres differensiering inn benmarg avledet dendrittiske celler og makrofager. Dermed kan retroviral signaltransduksjon etterfulgt av differensiering i vitro brukes til å uttrykke ulike cDNA konstruksjoner i disse cellene. Muligheten til å uttrykke ektopisk proteiner betydelig utvider utvalget av eksperimenter som kan utføres på disse cellene, inkludert levende celle imaging fluorescerende proteiner, tandem renselser for interactome analyser, struktur-funksjon analyser, overvåking av cellulære funksjoner med biosensors og mange andre. I denne artikkelen beskriver vi en detaljert protokoll for retroviral signaltransduksjon murine benmarg avledet dendrittiske celler og makrofager med vektorer koding for fluorescently-merket proteiner. På eksempel på to adapter proteiner, OPAL1 og PSTPIP2, viser vi den praktiske anvendelsen i flowcytometri og mikroskopi. Vi diskuterer også fordeler og begrensninger av denne tilnærmingen.