Gevoelige meting van Mitophagy door Stroom Cytometry met behulp van de pH-afhankelijke fluorescerende verslaggever mt-Keima

Mitophagy is een proces van selectief verwijderen van beschadigde of onnodige mitochondriën met behulp van autophagy machines. Nauwe banden tussen defect mitophagy en verschillende ziekten bij de mens, met inbegrip van neurodegeneratieve ziekten, kanker en metabole ziekten gevonden. Daarnaast hebben recente studies aangetoond dat mitophagy is betrokken bij normale cellulaire processen, zoals differentiatie en ontwikkeling. Echter, de precieze rol van en de moleculaire mechanismen ten grondslag liggen aan de mitophagy nader moeten worden onderzocht. Daarom is het van cruciaal belang voor het ontwikkelen van een krachtige en handige methode voor het meten van veranderingen in de mitophagy activiteit. Hier beschrijven we een gedetailleerd protocol voor kwantitatief beoordeling mitophagy activiteit via cytometry van de stroom met behulp van de mitochondriën-gerichte fluorescent proteïne Keima (mt-Keima). Deze stroom cytometry assay kunt analyseren mitophagy activiteit sneller en gevoeliger dan conventionele microscopie of immunoblotting gebaseerde methoden. Dit protocol kan worden toegepast om te analyseren mitophagy activiteit in verschillende celtypen.