Isolering och identifiering av extravaskulära immunceller i hjärtat

Immunförsvaret är en viktig komponent i ett friskt hjärta. Hjärtmuskeln är hem för en rik population av olika immunceller undergrupper med funktionell uppdelning under steady-state och olika former av inflammation. Tills nyligen, studiet av immunceller i hjärtat krävs användning av mikroskopi eller dåligt utvecklad matsmältning-protokollen, som tillhandahålls tillräckligt känslighet under svår inflammation men kunde inte tryggt identifiera små — men nyckel — populationer av celler under steady-state. Här diskuterar vi en enkel metod kombinerar enzymatisk (kollagenas, hyaluronidas och DNAse) och mekanisk nedbrytning av murina hjärtan föregås av Intravaskulär administrering av fluorescently-märkta antikroppar att skilja liten men oundvikliga intravaskulära cell föroreningar. Metoden genererar en suspension av isolerade viabla celler som kan analyseras med flödescytometri för identifiering, fenotypning och kvantifiering, eller ytterligare renas med fluorescens-aktiverad cell sortering eller magnetiska pärla separation för transkriptionell analys eller in vitro- studier. Vi har ett exempel på en stegvisa flöde flödescytometrisk analys att skilja de viktiga makrofager och dendritiska cellpopulationer av hjärtat. För en medellång medelstora experiment (10 hjärtan) kräver avslutningen av förfarandet 2 – 3 h.