PCR quantitative du bactériophage T7 de criblage

Ce protocole décrit l’utilisation de la PCR quantitative (qPCR) pour énumérer les phages T7 d’expériences de sélection phage (c'est-à-dire, « biopanning »). qPCR est une approche axée sur la fluorescence pour quantifier l’ADN, et ici, il est adapté pour quantifier les génomes phagiques comme une approximation des particules phagiques. Dans le présent protocole, un procédé de préparation d’ADN de phage facile est décrite à l’aide de chauffage haute température sans purification d’ADN supplémentaire. La méthode n’a besoin que de petites quantités de phages traité thermiquement et de petits volumes de la réaction de qPCR. qPCR est haut débit et rapide, capable de traiter et d’obtenir des données d’une plaque à 96 puits de réactions en 2 à 4 h. par rapport aux autres approches d’énumération phage, qPCR soit le plus court possible. Ici, qPCR est utilisée pour énumérer les phages T7 identifiés de criblage contre modèle in vitro de mucus comme la fibrose kystique. La méthode de qPCR peut être étendue pour quantifier les phages T7 d’autres expériences, y compris d’autres types de protéines (p. ex.., dépistage de phage immobilisé la liaison aux protéines, in vivo ) et d’autres sources (par exemple, les systèmes de l’eau ou des liquides organiques). En résumé, ce protocole peut être modifié afin de quantifier des virus à ADN-encapsulé.