Abstract
Biochemistry
近年来, 原子力显微镜 (AFM) 基于单分子力谱 (smf) 扩展了我们对分子性质和功能的理解。它使我们有机会探索生物物理机制的多样性,例如, 细菌 adhesins 如何更详细地绑定到宿主表面受体。除其他因素之外, smf 实验的成功取决于固体表面和 AFM 尖端的生物分子的功能性和本地固定性。在这里, 我们描述了一个简单的协议, 蛋白质与硅表面的共价耦合, 用硅烷-PEG-羧基和建立良好的 n-hydroxysuccinimid/1-3-(3-二甲基氨基丙基) carbodiimid (EDC/NHS) 化学, 以目的探讨 pilus-1 黏附 RrgA 与细胞外基质蛋白纤维结合体 (Fn) 在革兰阳性菌肺炎链球菌中的相互作用。我们的结果表明, 表面功能化导致 Fn 在玻璃表面的均匀分布, 并在 AFM 悬臂尖的适当浓度 RrgA, 明显的目标值高达20% 的互动事件在 smf测量和揭示, RrgA 绑定到 Fn 的平均力量 52 pN。该协议可以调整到夫妇通过网站特定的自由硫醇组。这将导致预定义的蛋白质或分子方向, 并适用于除 smf 之外的其他生物物理应用。
Explore More Videos
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved