Abstract
Biochemistry
Son yıllarda, atomik kuvvet mikroskobu (AFM) bizim anlayış moleküler özellikleri ve işlevleri genişletilmiş tek molekül kuvvet spektroskopisi (SMFS) temel. Bize bir çokluğu biyofiziksel mekanizmaları, Örneğin, ana bilgisayar yüzey reseptörlerinin daha ayrıntılı nasıl bakteriyel adhesins bağlama keşfetme fırsatı verdi. Diğer faktörler arasında katı yüzeyler ve AFM ipuçları üzerinde ilgi biomolecules fonksiyonel ve yerel immobilizasyon SMFS deneyler başarısı bağlıdır. Burada, silikon yüzeylere silane-PEG-carboxyls ve köklü N-hydroxysuccinimid/1-ethyl-3-(3-dimethyl-aminopropyl)carbodiimid (EDC/NHS) Kimya sırada kullanarak proteinlerin kovalent kaplin için basit bir protokol tanımlayan pilus-1 adhesin RrgA arasındaki etkileşimin gram-pozitif bakteri Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae) hücre dışı matriks proteini fibronektin (Fn) ile keşfetmek için. Yüzey functionalization Fn homojen bir dağılım cam yüzeyi ve RrgA uygun bir konsantrasyon ucunda AFM prensibine göre hedef değeri ile etkileşim olaylar sırasında SMFS % 20'e kadar belirgin yol bizim sonuçları göster ölçümleri ve RrgA 52 pN bir kaba kuvvet ile Fn için bağlar ortaya koydu. Protokol çift üzerinden site belirli ücretsiz thiol grupları için ayarlanabilir. Bu önceden tanımlanmış bir protein veya molekül yönde sonuçlar ve SMFS yanı sıra biyofiziksel diğer uygulamalar için uygundur.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved