Transiente Expression in Nicotiana Benthamiana Blätter für Triterpene Produktion im präparativen Maßstab

Die TRITERPENE sind eines der größten und die meisten strukturell unterschiedlichen Familien von pflanzlichen Naturprodukten. Viele Triterpene Derivate haben gezeigt, dass medizinisch relevanten biologischen Aktivität besitzen. Allerdings hat dieses Potenzial bisher nicht in eine Fülle von Triterpene stammenden Drogen in der Klinik umgesetzt. Dies ist wohl (zumindest teilweise) führen eine Folge der begrenzten praktischen synthetischen Zugang zu dieser Klasse Verbindung, ein Problem, das die Erforschung von Struktur-Aktivitäts-Beziehungen und Entwicklung von ersticken kann Kandidaten durch traditionelle Arzneimittel Chemie-Workflows. Trotz ihrer immensen Vielfalt TRITERPENE alle stammen aus einer einzigen linearen Vorläufer 2,3-Oxidosqualene. Transiente heterologen Expression von biosynthetischen Enzymen in N. Benthamiana kann endogene Lieferungen von 2,3-Oxidosqualene auf die Herstellung von qualitativ hochwertigen Triterpene Neuheiten abzulenken, die natürlich nicht von diesem Host hergestellt werden. Agro-Infiltration ist eine effiziente und einfache Mittel zur Erreichung transiente Expression in N. Benthamiana. Der Prozess umfasst Infiltration der Blätter der Pflanze mit einer Suspension von Agrobacterium Tumefaciens tragen den Ausdruck Construct(s) von Interesse. Co Infiltration von einer zusätzlichen A. Tumefaciens Belastung tragen, ergibt sich ein Ausdruck Konstrukt Codierung, die ein Enzym, das Vorläufer Versorgung deutlich steigert erhöht. Nach einer Frist von fünf Tagen kann zu extrahieren und zu isolieren, die sich daraus ergebenden Triterpene Produkte die eingedrungene Blattmaterial geerntet und verarbeitet werden. Dies ist ein Prozess, der zuverlässig und Linear skalierbar ist einfach durch Erhöhung der Anzahl der Pflanzen in das Experiment. Hierin ist ein Protokoll für schnelle präparative-Produktion der TRITERPENE, die Verwendung dieser pflanzlichen Plattform beschrieben. Das Protokoll nutzt eine Vorrichtung leicht replizierbar Vakuum Infiltration, ermöglicht das gleichzeitige Eindringen von bis zu vier Anlagen, diskontinuierlichen Infiltration von Hunderten von Pflanzen in kurzer Zeit ermöglicht.