Utredande däggdjur Axon regenerering: In Vivo elektroporation av vuxen mus dorsalrotsganglier Ganglion

Elektroporation är ett viktigt icke-virala gen transfection förhållningssätt att införa DNA plasmider eller små RNA-molekyler i cellerna. En sensoriska neuron i dorsalrotsganglier ganglion (DRGs) sträcker sig en enda axon med två grenar. En gren går till perifera nerver (perifer gren), och den andra grenen går in i ryggmärgen genom dorsalrotsganglier (central branch). Efter neurala skadan regenererar grenen perifera kraftfullt medan den centrala grenen inte regenererar. På grund av den höga regenerativa kapaciteten, har sensoriska axon regenerering använts som ett modellsystem studera däggdjur axon förnyelse i både det perifera nervsystemet (PNS) och det centrala nervsystemet (CNS). Här beskriver vi ett tidigare etablerade tillvägagångssätt protokoll för att manipulera genuttryck i mogen sensoriska nervceller i vivo via elektroporation. Baserat på transfection med plasmider eller små RNA oligos (siRNAs eller mikroRNA), möjliggör metoden både förlust - och gain-of-function-experiment för att studera gener-av-intressen eller mikroRNA i regleringen av axon förnyelse i vivoroller. Dessutom kan manipulation av gen uttryck i vivo styras både spatialt och temporalt inom en relativt kort tid kurs. Denna modellsystem ger ett unikt verktyg för att undersöka de molekylära mekanismer som däggdjur axon regenerering är reglerade i vivo.