Abstract
Immunology and Infection
Herpesvirus af kalkuner (HVT) er en ideelle viral vektor for generation af rekombinante vacciner mod en række aviær sygdomme som aviær influenza (AI), Newcastle disease (ND) og smitsomme bursal disease (IBD), ved hjælp af bakteriel kunstige kromosom ( BAC) mutagenese eller konventionelle rekombination metoder. De grupperede regelmæssigt interspaced palindromiske gentagelser (CRISPR) / Cas9 systemet held har været anvendt i mange indstillinger for gen redigering, herunder manipulation af flere store DNA virus genomer. Vi har udviklet en effektiv og hurtig CRISPR/Cas9-medieret genom redigering rørledningen for at generere rekombinant HVT. For at maksimere den potentielle anvendelse af denne metode, præsenterer vi her detaljerede oplysninger om metoden til at generere rekombinant HVT udtrykker VP2 protein af IBDV. VP2 udtryk kassette er isat i HVT genom via en NHEJ (nonhomologous slutningen-sammenføjning)-afhængige reparation pathway. En grøn fluorescens protein (NGL) udtryk kassette er først knyttet til indsatsen til nem visualisering og derefter fjernet via Cre-LoxP system. Denne tilgang tilbyder en effektiv måde at indføre andre virale antigener i HVT genom for den hurtige udvikling af rekombinante vacciner.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved