Abstract
Immunology and Infection
Herpesvírus de perus (HVT) é um vetor viral ideal para a geração de vacinas recombinantes contra um número das doenças aviárias, tais como a gripe aviária (AI), doença de Newcastle (ND) e doenças infecciosas bolsas serosas (IBD), usando (cromossoma artificial bacteriano Mutagênese BAC) ou métodos convencionais de recombinação. O cluster regularmente intercaladas repetições palíndromos (CRISPR) / Cas9 sistema tem sido utilizado com sucesso em muitas configurações para edição de gene, incluindo a manipulação de vários genomas grandes vírus de DNA. Nós desenvolvemos um rápido e eficiente CRISPR/Cas9-mediada genoma edição pipeline para gerar recombinante HVT. Para maximizar o potencial de uso deste método, aqui apresentamos informações detalhadas sobre a metodologia de geração de HVT recombinante expressando a proteína VP2 de IBDV. A gaveta de expressão VP2 é inserida para o HVT genoma através um NHEJ (não-homólogos final-adesão)-caminho de reparação dependente. Uma gaveta de expressão de proteínas (GFP) fluorescência verde primeiro que consta a inserção para fácil visualização e em seguida removido através do Cre-LoxP sistema. Essa abordagem oferece uma maneira eficiente para introduzir outros antígenos virais no genoma da HVT para o rápido desenvolvimento de vacinas recombinantes.
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