Abstract
Cancer Research
A análise quantitativa da variação genética humana é crucial para compreender as características moleculares de doenças graves, como tumores. Porque digital polimerase reações em cadeia (PCR) permitem a quantificação precisa das variantes números de cópia do DNA, eles estão se tornando uma ferramenta essencial para a detecção de variações genéticas raras, tais como mutações resistentes aos medicamentos. Espera-se que o diagnóstico molecular usando PCR digital (dPCR) estará disponível na prática clínica num futuro próximo; assim, como conduzir eficientemente dPCR com material genético humano é um tema quente. Aqui, apresentamos um método para detectar mosaicismo somático Polipose Adenomatosa do colo (APC), usando dPCR com o formato de microplaqueta-em-um-tubo, que permite oito reações dPCR ser realizados simultaneamente. Deve ter cuidado ao enchimento e selagem a mistura de reação nas fichas. Este artigo demonstra como evitar o over - e subestimação das partições positivas. Além disso, apresentamos um procedimento simples para a coleta do produto dPCR de partições nas fichas, que podem ser usadas para confirmar a amplificação específica. Esperamos que este relatório métodos ajudará a promover o dPCR com o método de microplaqueta-em-um-tubo na pesquisa genética.
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