Abstract
Biochemistry
RNA-bindende Proteine (RBPs) spielen eine wichtige Rolle bei der Posttranskriptionale Kontrolle der Genexpression. Biochemische Charakterisierung der mRNA-Protein-komplexe ist daher für das Verständnis der mRNA-Verordnung abgeleitet von interagierenden Proteine oder nicht-kodierende RNAs. Hier beschreiben wir ein Tandem RNA Isolierung Verfahren (Reise), das die Reinigung von endogen gebildeten mRNA-Protein-komplexe aus Zellextrakten ermöglicht. Das zweistufige Protokoll beinhaltet die Isolierung von Polyadenylated, die mRNAs mit antisense oligo(dT) Perlen und spätere eine mRNA des Interesses mit 3' biotinylierte 2'-O-methyliert antisense RNA-Oligonukleotide, die dann mit isoliert werden können, zu erfassen Streptavidin-Perlen. Reise war wieder in Vivo querverbunden mRNA-Ribonucleoprotein (mRNP) komplexe aus Hefe, Nematoden und menschlichen Zellen für weitere RNA und Protein-Analyse verwendet. Reise ist ein vielseitiger Ansatz, der angepasst werden kann für alle Arten von Polyadenylated RNAs in Organismen, die dynamische Neuordnung der mRNPs auferlegten intrazelluläre oder ökologische Hinweise zu studieren.
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