Abstract
Biochemistry
RNA-bindande proteiner (RBPs) spelar viktiga roller för post-transcriptional kontroll av genuttryck. Biokemisk karakterisering av mRNA-proteinkomplex är därför nödvändig för att förstå mRNA förordning slutsatsen av samverkande proteiner eller icke-kodande RNAs. Häri, beskriver vi ett tandem RNA isolering förfarande (resa) som möjliggör rening av endogent bildade mRNA-proteinkomplex från cellulära extrakt. Två-stegs protokollet innebär isolering av polyadenylated mRNA med antisense oligo(dT) pärlor och efterföljande fånga en mRNA av intresse med 3'-biotinylerade 2'-O-metylerat antisense-RNA oligonukleotider, som sedan kan isoleras med streptividin pärlor. RESAN var används för att återställa i vivo tvärbundna mRNA-ribonukleoprotein (mRNP) komplex från jäst, nematoder och mänskliga celler för ytterligare RNA och protein analys. Således, resa är en mångsidig strategi som kan anpassas till alla typer av polyadenylated RNAs över organismer att studera dynamiska omflyttningen av mRNPs som införts av intracellulära eller miljömässiga Biljardköer.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved