एक क्रोमेटिन Immunoprecipitation परख पुरानी लिम्फोसाईटिक ल्यूकेमिया में उपंयास NFAT2 लक्ष्य जीन की पहचान करने के लिए

क्रोनिक लिम्फोसाईटिक ल्यूकेमिया (CLL) घातक बी सेल क्लोन के विस्तार की विशेषता है और पश्चिमी देशों में सबसे आम ल्यूकेमिया का प्रतिनिधित्व करता है । CLL रोगियों के बहुमत रोग के एक indolent पाठ्यक्रम के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अपने ल्यूकेमिया कोशिकाओं के एक anergic phenotype, एक बी सेल बाहरी उत्तेजना के लिए अप्रतिसादी रिसेप्टर की चर्चा करते हुए दिखाते हैं । हमें हाल ही में पता चला है कि प्रतिलेखन फैक्टर NFAT2 CLL में anergy का एक महत्वपूर्ण नियामक है । विभिंन रोगों में एक प्रतिलेखन कारक की भूमिका के विश्लेषण में एक प्रमुख चुनौती अपने विशिष्ट लक्ष्य जीन की पहचान है । यह विकारी तंत्र और संभावित चिकित्सीय हस्तक्षेप के elucidation के लिए बहुत महत्व का है । क्रोमेटिन immunoprecipitation (चिप) एक क्लासिक के लिए प्रोटीन डीएनए बातचीत और, इसलिए, स्तनधारी कोशिकाओं में प्रतिलेखन कारकों के प्रत्यक्ष लक्ष्य जीन की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता प्रदर्शन तकनीक है । यहां, चिप मानव CLL कोशिकाओं में NFAT2 का सीधा लक्ष्य जीन के रूप में LCK की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया गया था । डीएनए और जुड़े प्रोटीन crosslinked formaldehyde का उपयोग कर रहे है और बाद में sonication द्वारा लगभग 200-500 आधार जोड़े (बीपी) के डीएनए टुकड़ों में बाल काटना । पार से जुड़े डीएनए NFAT2 के साथ जुड़े टुकड़े तो चुनिंदा एक αNFAT2 एंटीबॉडी का उपयोग कर सेल मलबे से immunoprecipitated हैं । शुद्धि के बाद, जुड़े डीएनए टुकड़े मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर (qRT-पीसीआर) के माध्यम से पता चला रहे हैं । स्पष्ट संवर्धन के साथ डीएनए अनुक्रम NFAT2 द्वारा vivo मेंलक्षित कर रहे हैं, जो जीनोम के क्षेत्रों का प्रतिनिधित्व करते हैं । डीएनए की उचित कतरन और आवश्यक एंटीबॉडी के चयन इस विधि के सफल आवेदन के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण हैं । इस प्रोटोकॉल लक्ष्य जीन के साथ NFAT2 के प्रत्यक्ष बातचीत के प्रदर्शन के लिए आदर्श है । इसकी प्रमुख सीमा कठिनाई बड़े पैमाने पर बरकरार जीवों में एकाधिक प्रतिलेखन कारकों के लक्ष्य जीन का विश्लेषण परख में चिप को रोजगार है ।