Этикетка свободной идентификации лимфоцитов подтипы, с использованием трехмерных количественных этап визуализации и машинного обучения

Здесь мы описываем протокол для лейбл свободной идентификации подтипы лимфоцитов с помощью количественных фазы создания образов и машинного обучения. Определение подтипы лимфоцит имеет важное значение для исследования иммунологии, а также диагностики и лечения различных заболеваний. В настоящее время стандартные методы для классификации типов лимфоцитов полагаются на маркировке конкретных мембранных белков через реакции антиген антитело. Однако эти методы маркировки несут потенциальные риски изменения клеточных функций. Протокол, описанные здесь преодолевает эти проблемы, используя встроенный оптический контрастов, измеряется изображений 3D количественную фазу и алгоритм машинного обучения. Измерение 3D преломления (RI) томограмм лимфоцитов обеспечивает количественную информацию о 3D морфологии и фенотипы отдельных клеток. Биофизических параметров, извлеченных из измеренных 3D ри томограмм затем количественно проанализированы с алгоритм обучения машины, позволяя лейбл свободной идентификации типов лимфоцитов на уровне одной ячейки. Мы измерить 3D ри томограмм B, T CD4 + и CD8 + T-лимфоцитов и определили их типы клеток с более чем 80% точность. В этом протоколе мы описывают подробные шаги для лимфоцитов изоляции, 3D количественных этап визуализации и машинного обучения для выявления типов лимфоцитов.