تحليلاً تخليق البروتين البربخيه وإفراز

البربخ الثدييات يولد واحد من السوائل intraluminal أعقد من أي الغدة الصماء بغية دعم الخصية بعد نضوج وتخزين المني. وينشأ هذا التعقيد نظراً لنشاط الخلايا الظهارية بطانة افرازية والاستيعابية مجتمعة. هنا، يمكننا وصف تقنيات لتحليل البروتين البربخيه وإفراز بالتركيز على نموذج الأسرة البروتين من ميتشانوينزيميس دينامين (الإدارة)؛ جتباسيس الكبيرة التي لديها إمكانات لتنظيم الاتجار الأحداث غشاء ثنائي الاتجاه. لدراسة التعبير البروتين في الأنسجة البربخيه، يمكننا وصف منهجية قوية لوسم الفلورة البروتينات المستهدفة في أقسام جزءا لا يتجزأ من البارافين والكشف عن اللاحقة للتوزيع المكاني لهذه البروتينات عن طريق مجهر الفلورة. ونحن أيضا وصف المنهجية الأمثل لعزل وتوصيف اكسوسومي مثل حويصلات، المعروفة باسم ابيديديموسوميس، وهي تفرز في التجويف البربخيه للمشاركة في الاتصالات بين الخلايا مع نضوج الخلايا المنوية. كنهج تكميلي، يصف لنا أيضا كشف الفلورة البروتينات المستهدفة في خط خلية الظهارية البربخيه (mECap18) نصيب خلد SV40 ماوس. وعلاوة على ذلك، فإننا نناقش الأداة خط الخلية mECap18 كنموذج مناسب في المختبر لاستكشاف تنظيم نشاط افرازي البربخيه معها. لهذا الغرض، يصف لنا تثقيف متطلبات الصيانة خط الخلية mECap18 واستخدام أنظمة انتقائية تثبيط الدوائية القادرة على التأثير على بروتين افرازي الشخصية. سهولة تقييم هذه الأخيرة عن طريق الحصاد مكيفة الثقافة المتوسطة، وتركيز البروتينات يفرز عن طريق ترسيب حمض التريكلوروسيتيك/الأسيتون وتحليلها لاحقاً عبر الحزب الديمقراطي الصربي صفحة و immunoblotting. نؤكد أن هذه الأساليب مجتمعة مناسبة لتحليل الأهداف البديلة البروتين البربخيه تمهيدا لتحديد دورها الوظيفي في نضوج الحيوانات المنوية و/أو تخزين.