Визуализация узлов и Notochordal пластины в Gastrulating эмбрионов мыши, используя растровая электронная микроскопия и вся гора иммунофлуоресценции

Мыши после имплантации эмбриона претерпевает изменения основных формы после начала гаструляция и морфогенеза. Отличительной чертой морфогенеза является формирование переходных организаторов, узел и notochordal плиты, из клеток, которые прошли через примитивных полоска. Надлежащее формирование этих сигналов центров имеет важное значение для разработки плана тела и методы, чтобы визуализировать их представляют большой интерес для развития биологов мыши. Узел и notochordal плиты лежат на вентральной поверхности gastrulating эмбрионов мыши вокруг эмбриональных день (E) 7.5 развития. Узел является структурой Чашеобразная, клетки которых имеют одну стройную ресничку. Правильной субцеллюлярные локализации и вращение реснички в яму узла определяет асимметрия слева направо. Notochordal плита клетки также обладают одной реснички хотя короче, чем те из узла клеток. Notochordal плита образует хорда, которое выступает организатором важных сигналов для somitogenesis и нейронных патронирования. Потому что клетки узла и notochordal пластины временно присутствуют на поверхности и обладают ресничек, они могут быть визуализированы с помощью растровая электронная микроскопия (SEM). Среди других методов, используемых для визуализации этих структур на клеточном уровне является вся гора иммунофлюоресценции (WMIF) с использованием антител против белки, которые сильно выражены в узел и notochordal пластины. В настоящем докладе мы описываем наши оптимизированные протоколы для выполнения SEM и WMIF узла и notochordal пластины в развивающихся эмбрионов мыши чтобы помочь в оценке формы тканей и клеточных Организации в одичал типа и мутантов гаструляция эмбрионов.