Isolasjon hepatocytes hovedknappen på musen for begynnende Protein syntese analyse av ikke-radioaktivt L-azidohomoalanine merking metoden

Hepatocytter er parenchymal celler i leveren og engasjere flere metabolske funksjoner, inkludert syntese og sekresjon av proteiner viktig for systemisk energi homeostase. Primære hepatocytter isolert fra murine leveren utgjør et verdifullt biologiske verktøy for å forstå funksjonelle egenskaper eller endringer forekommer i leveren. Her vi beskriver en metode for isolasjon og kultur hepatocytes hovedknappen på musen ved å utføre en totrinns collagenase perfusjon teknikk og diskutere utnyttelse for å undersøke protein metabolisme. Leveren av en voksen mus er sekvensielt parfyme med etylenglykol-bis tetraacetic syre (EGTA) og collagenase, etterfulgt av isolering av hepatocytter med tetthet gradert bufferen. Disse isolerte hepatocytter er levedyktig på kultur plater og opprettholde fleste utstyrt egenskaper hepatocytes. Disse hepatocytter kan brukes for vurderinger av protein metabolisme inkludert begynnende proteinsyntese med ikke-radioaktivt reagenser. Vi viser at de isolerte hepatocytter er lett kontrollert og utgjør en høyere kvalitet og volum stabilitet i proteinsyntese knyttet til energi metabolism ved å benytte chemo-selektiv ligation reaksjon med et Tetramethylrhodamine (TAMRA) protein oppdagelse metode og vestlige blotting analyser. Denne metoden er derfor verdifulle for å undersøke hepatic begynnende proteinsyntese knyttet til energi homeostase. Følgende protokollen skisserer materialer og metoder for isolering av høy kvalitet hovedknappen på musen hepatocytter og påvisning av begynnende proteinsyntese.