Изоляция первичного мыши гепатоцитов для зарождающейся белка синтез анализа методом маркировки нерадиоактивные L-azidohomoalanine

Гепатоциты Паренхиматозный клетки печени и заниматься несколько метаболические функции, в том числе синтез и секрецию белков, необходимых для системного энергетического гомеостаза. Основная гепатоцитов, изолированных из мышиных печени являются ценные биологические инструментом для понимания функциональных свойств или изменений, происходящих в печени. Здесь мы описывают метод для изоляции и культуры мыши гепатоцитов, выполняя двухэтапный метод коллагеназы перфузии и обсудить их использования для изучения метаболизма белков. Печень взрослой мыши последовательно увлажненную с этиленгликоль бис tetraacetic кислоты (EGTA) и коллагеназы, следуют изоляции гепатоцитов с буфером градиента плотности. Эти изолированных гепатоцитов жизнеспособной на культуре тарелки и сохранить большинство обеспеченных характеристики гепатоцитов. Эти гепатоцитов могут использоваться для оценки белкового обмена, включая синтез зарождающейся белка с нерадиоактивных реагентов. Мы покажем, что изолированных гепатоцитов легко контролируются и включать более высокие качество и объем стабильности синтеза белка, связаны с энергии метаболизма, используя реакции перешнуровки химио селективный с протеином тетраметилродамина (ТАМРА) метод обнаружения и западных blotting анализы. Таким образом этот метод является ценным для расследования синтеза гепатопротеинов зарождающейся, связаны с энергетического гомеостаза. Следующий протокол изложены материалы и методы для изоляции высокого качества первичных мыши гепатоцитов и выявление зарождающихся белкового синтеза.