In Vivo To-foton billeddannelse af kortikale neuroner i Neonatal mus

To-foton imaging er et kraftfuldt værktøj i vivo analyse af neuronal kredsløb i hjernen, pattedyr. Dog findes et begrænset antal i vivo billeddannelse metoder for behandlingen af hjernevæv af levende nyfødte pattedyr. Heri opsummere vi en protokol for imaging individuelle kortikale neuroner i levende neonatal mus. Denne protokol omfatter de følgende to metoder: (1) Supernova system for sparsom og lyse mærkning af kortikale neuroner i udviklingslandene hjernen, og (2) en kirurgisk procedure for skrøbelige neonatal kraniet. Denne protokol giver mulighed for observation af tidsmæssige ændringer af individuelle kortikale neurites neonatal etaper med en høj signal-støj-forhold. Mærket celle-specifik genhæmning og knockout kan også opnås ved at kombinere Supernova med RNA-interferens og CRISPR/Cas9 gen redigering systemer. Denne protokol kan således bruges til at analysere den udviklingsmæssige dynamics af kortikale neuroner, molekylære mekanismer, der styrer neuronal dynamics, og ændringer i neuronal dynamics i sygdomsmodeller.