Высок объём измерение плазматической мембраны запечатывания эффективность в клетках млекопитающих

В их физиологической среде часто подвергаются mammalian клеток механических и биохимических напряжений, которые приводят к повреждению плазматической мембраны. В ответ на эти убытки сложных молекулярных механизмов быстро запечатайте плазматической мембраны для восстановления ее барьерные функции и поддержания выживание клетки. Несмотря на 60 лет исследований в этой области мы все еще не имеют глубокое понимание ячейки запечатывания машины. С целью выявления клеточных компонентов этого управления плазматической мембраны запечатывания или препараты, которые могут улучшить запечатывания, мы разработали на основе флуоресценции высок объём assay, который измеряет плазматической мембраны, запечатывания эффективность в клетках млекопитающих культивируемых в планшет. Как модель системы для повреждения плазматической мембраны, клетки подвергаются бактериальной порами формирования токсин листериолизин O (LLO), который образует большие 30-50 Нм диаметр белковых поры в холестерин содержащих мембраны. Использование контролируемой температурой Гонав мульти-режим чтения позволяет для быстрого и чувствительной spectrofluorometric измерений в сочетании с brightfield и флуоресцентной микроскопии изображений живых клеток. Кинетический анализ интенсивности флуоресценции, испускаемых мембраны impermeant нуклеиновые кислоты привязки флюрохром отражает степень мембраны ранения и запечатывания на клеточном уровне населения, позволяя для расчета эффективности запечатывания ячейки . Флуоресцентной микроскопии изображений позволяет для перечисления клеток, которые конститутивно Экспресс флуоресцентные Химера ядерных белков гистонов 2b, в каждой скважине микропланшетов с учетом потенциальных различий в их количество и позволяет для возможного Идентификация отдельных клеточных популяций. Этот assay высок объём является мощным инструментом предполагается расширить наше понимание мембранных механизмов ремонта через скрининга для принимающих генов или экзогенно добавил соединений, что управления запечатывания плазматической мембраны.