Monitoraggio non invasivo della dimensione della lesione in un modello murino eterologo di endometriosi

Qui, descriviamo un protocollo per l'attuazione di un modello di topo eterologo in cui progressione di endometriosi può essere valutata in tempo reale attraverso il monitoraggio non invasivo della fluorescenza emessa dal tessuto dell'endometrio umano ectopico impiantato. Per questo scopo, le biopsie dell'endometrio umano vengono ottenute dalla donazione di ovociti in corso donne di donatore. Frammenti dell'endometrio umani sono coltivate in presenza di adenovirus progettato per esprimere cDNA per il reporter proteina fluorescente mCherry. Al momento della visualizzazione, etichettato tessuti con un tasso ottimo di fluorescenza dopo infezione successivamente vengono scelti per l'impianto in topi destinatari. Una settimana prima dell'intervento di impianto, destinatari topi sono oophorectomized e pallini di estradiolo sono posizionati per via sottocutanea per sostenere la sopravvivenza e la crescita delle lesioni. Il giorno dell'intervento, i topi sono anestetizzate e peritoneale cavità accessibili attraverso un'incisione di piccole dimensioni (1,5 cm) da linea-alba. Impianti fluorescente contrassegnati sono tweezed, brevemente imbevuti di colla e attaccati allo strato peritoneale. Incisioni sono suturate e gli animali lasciati a recuperare per un paio di giorni. Fluorescenza emessa da impianti endometriosici solitamente non invasivo è monitorata ogni 3 giorni per 4 settimane con un sistema di imaging in vivo. Variazioni nelle dimensioni di impianti endometriosici possono essere stimate in tempo reale mediante la quantificazione del segnale mCherry e normalizzazione contro il tempo-punto iniziale che mostra l'intensità di fluorescenza massima.

Roditori tradizionale preclinici di modelli di endometriosi non consentono il monitoraggio non invasivo della lesione in tempo reale, ma piuttosto consentono la valutazione degli effetti di farmaci dosati al punto finale. Questo protocollo permette di tenere traccia di lesioni in tempo reale ed è più utile per esplorare il potenziale terapeutico di farmaci in modelli preclinici di endometriosi. Il limite principale del modello così generato è che il monitoraggio non invasivo non è possibile per lunghi periodi di tempo a causa dell'espressione episomal del annuncio-virus.