Monitoreo no invasivo del tamaño de la lesión en un modelo de ratón heterólogos de la Endometriosis

Aquí, describimos un protocolo para la implementación de un modelo de ratón heteróloga en la que la progresión de la endometriosis puede evaluarse en tiempo real a través de monitoreo no invasivo de la fluorescencia emitida por tejido endometrial humano ectópico implantado. Para ello, se obtienen biopsias de endometrio humano de donación de ovocitos curso de mujeres donantes. Fragmentos de endometrio humanos son cultivadas en presencia de adenovirus diseñados para expresar cDNA para el reportero proteína fluorescente mCherry. Sobre visualización, etiquetados como los tejidos con una tasa óptima de fluorescencia después de infección son posteriormente seleccionados para la implantación en ratones receptores. Una semana antes de la cirugía de implantación, ratones receptores son ooforectomizadas, y pastillas de estradiol se colocan subcutáneamente para mantener la supervivencia y el crecimiento de las lesiones. En el día de la cirugía los ratones son anestesia y peritoneal cavidad accedida a través de una incisión pequeña (1,5 cm) por la linea-alba. Fluorescencia de etiquetado implantes son tweezed, brevemente empapados en pegamento y Unidos a la capa peritoneal. Incisiones se suturan, y animales a la izquierda para recuperar un par de días. Fluorescencia emitida por implantes endometriotic generalmente no invasiva se controla cada 3 días durante 4 semanas con un sistema de proyección de imagen in vivo. Variaciones en el tamaño de los implantes endometriósicos se pueden estimar en tiempo real por la cuantificación de la señal mCherry y normalización contra el momento inicial que muestra la intensidad de la fluorescencia máxima.

Tradicionales roedores preclínicas de los modelos de la endometriosis no permiten monitoreo no invasivo de la lesión en tiempo real pero que permiten la evaluación de los efectos de las drogas analizadas en el punto final. Este protocolo permite un seguimiento de las lesiones en tiempo real y es más útil para explorar el potencial terapéutico de los fármacos en modelos preclínicos de la endometriosis. La principal limitación del modelo así generado es que el monitoreo no invasivo no es posible durante largos períodos de tiempo debido a la expresión episomal del Ad virus.