Incorporación genética de biosintetizada a partir de L-dopa (DOPA) y su aplicación a la conjugación de proteínas

L-dopa (DOPA) es un aminoácido encontrado en la biosíntesis de catecolaminas en animales y plantas. Debido a sus propiedades bioquímicas, el aminoácido tiene múltiples usos en aplicaciones bioquímicas. Este informe describe un protocolo para la incorporación genética de biosynthesized DOPA y su aplicación a la conjugación de proteínas. El DOPA es biosintetizada a partir de una tirosina fenol-liasa (TPL) de catecol, piruvato y amoníaco, y el aminoácido se incorpora directamente a las proteínas por el método de incorporación genética mediante un evolucionado aminoacil-tRNA y aminoacil-tRNA sintetasa par. Este sistema de incorporación directa incorpora eficientemente DOPA con poca incorporación de otros aminoácidos naturales y con mejor rendimiento de proteína que el sistema anterior de la incorporación genética de DOPA. Conjugación de proteínas con proteínas que contienen el DOPA es eficiente y site-specific y demuestra su utilidad para diversas aplicaciones. Este protocolo proporciona a los científicos de la proteína con los procedimientos detallados para la eficiente biosíntesis de proteínas del mutante que contiene DOPA en sitios deseados y su conjugación para aplicaciones industriales y farmacéuticas.