Geautomatiseerde Multiplex immunofluorescentie paneel voor Immuno-oncologie Studies over formaline-vaste Carcinoma weefsel Specimens

Verdere ontwikkelingen in immuno-oncologie vereisen een toegenomen inzicht in de mechanismen van kanker immunologie. De immunoprofiling analyse van weefselmonsters van Biopten van formaline-vaste, paraffine-ingebedde (FFPE) is een belangrijk instrument voor inzicht in de complexiteit van de Tumorimmunologie en ontdekken van nieuwe voorspellende biomarkers voor kanker immunotherapie geworden. Immunoprofiling analyse van weefsels vereist de evaluatie van gecombineerde markers, met inbegrip van inflammatoire cel subpopulaties en immuun controleposten, in de communicatie van de tumor. De komst van de nieuwe multiplex immunohistochemische methoden zorgt voor een efficiënter multiparametric analyse van enkele weefselsecties dan standaard monoplex immunohistochemistry (IHC). Een commercieel beschikbare multiplex immunofluorescentie zorgt (IF) methode is gebaseerd op tyramide-signaal versterking en, in combinatie met multispectrale microscopische analyse, voor een betere scheiding van het signaal van uiteenlopende markers in weefsel. Deze methodologie is compatibel met het gebruik van unconjugated primaire antilichamen die zijn geoptimaliseerd voor standaard IHC op FFPE weefselmonsters. Hierin beschrijven we in detail een geautomatiseerde protocol waarmee multiplex als etikettering van weefselmonsters carcinoom met een zes-marker multiplex antilichaam panel bestaande uit PD-L1, PD-1, CD68 CD8, Ki-67 en AE1/AE3 Cytokeratines met 4 ', 6-diamidino-2-phenylindole Als een nucleaire cel counterstain. Het protocol multiplex deelvenster wordt in een geautomatiseerde IHC stainer geoptimaliseerd voor een kleuring tijd die korter is dan die van de handmatige protocol en kan worden direct toegepast en aangepast door elk laboratorium-Detective voor immuno-oncologie studies over menselijke FFPE weefselmonsters. Ook beschreven zijn verschillende controles en instrumenten, met inbegrip van een drop-control methode voor fijne controle van de kwaliteit van een nieuwe multiplex als panel, die nuttig voor de optimalisatie en validatie van de techniek zijn.