Controle van Hippo signalering Pathway activiteit met behulp van een Biosensor Luciferase gebaseerde grote Tumor Suppressor (LATS)

Het nijlpaard signalering traject is een geconserveerde regulator van orgel grootte en heeft een belangrijke rol in de ontwikkeling en kanker biologie. Als gevolg van technische uitdagingen blijft het moeilijk de activiteiten beoordelen van dit signalering traject en interpreteren in een biologische kader. De bestaande literatuur over grote tumor suppressor (LATS) is afhankelijk van de methoden die zijn kwalitatieve en kunnen niet gemakkelijk worden geschaald-up voor screening. Onlangs hebben we een bioluminescentie gebaseerde biosensor voor het controleren van het kinaseactiviteit van LATS-een kernonderdeel van de Hippo kinase cascade ontwikkeld. We beschrijven hier, procedures voor hoe deze LATS biosensor (LATS-BS) kan worden gebruikt voor het karakteriseren van Hippo traject regelgevers. Ten eerste bieden wij een gedetailleerd protocol voor het onderzoeken van het effect van een overexpressie eiwit kandidaat (bijvoorbeeldVEGFR2) op LATS activiteit met behulp van de LATS-BS. Vervolgens laten we zien hoe de LATS-BS kan worden gebruikt voor een kleinschalige kinase inhibitor van de omwenteling-scherm. Dit protocol kan redelijkerwijs worden geschaald uit te voeren van de grotere schermen, die ongetwijfeld roman regelgevers van de Hippo-pathway identificeren zal.